Quel est le but de l'utilisation des ddNTP ?
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Vidéo: Quel est le but de l'utilisation des ddNTP ?

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Vidéo: Sanger sequencing 2024, Novembre
Anonim

DdNTP fait référence à Didésoxynucléotides triphosphates qui sont utilisés dans la méthode didésoxy de Sanger pour produire différentes longueurs de brins d'ADN pour le séquençage de l'ADN. Cela entraîne l'arrêt du processus de polymérisation de l'ADN (ou d'allongement de l'ADN) car ce processus nécessite un groupe 3'-OH pour continuer.

De ce fait, pourquoi les ddNTP sont-ils utilisés dans le séquençage ?

Didésoxynucléotides sont des inhibiteurs d'allongement de chaîne de l'ADN polymérase, utilisé dans la méthode Sanger pour l'ADN séquençage . Les didésoxyribonucléotides n'ont pas de groupe hydroxyle 3', donc aucun allongement de chaîne supplémentaire ne peut se produire une fois que ce didésoxynucléotide est sur la chaîne. Cela peut conduire à la terminaison de l'ADN séquence.

De même, les ddNTP s'attachent-ils aux dNTP ? Un ou plusieurs des dNTP sont marqués radioactivement pour aider à visualiser les produits de réplication. Enfin, chaque tube reçoit l'un des quatre nucléotides spéciaux appelés didésoxynucléotides ( ddNTP ). Cependant, une fois incorporée, l'ADN polymérase ne peut pas étendre davantage la chaîne car elle a besoin d'un 3'-OH pour attacher au nucléotide suivant.

De même, on peut se demander comment les ddNTP arrêtent une réaction de séquençage ?

Lorsqu'il est présent en petites quantités dans réactions de séquençage , didésoxyribonucléoside triphosphates ( ddNTP ) mettre fin au réaction de séquençage à différentes positions dans les brins d'ADN en croissance. Les ddNTP arrêtent une réaction de séquençage car ils: provoquent la chute de l'ADN polymérase du brin matrice. c.

Quelle technique impliquant des didésoxynucléotides pourrait être utilisée ?

Le séquençage de Sanger est un méthode du séquençage de l'ADN basé sur l'incorporation sélective de didésoxynucléotides par l'ADN polymérase lors de la réplication de l'ADN in vitro. Développé par Frederick Sanger et ses collègues en 1977, c'était le plus largement utilisé séquençage méthode depuis environ 40 ans.

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