Vidéo: Que se passe-t-il si vous ajoutez trop d'enzyme de restriction ?
2024 Auteur: Stanley Ellington | [email protected]. Dernière modifié: 2023-12-16 00:16
Une digestion incomplète peut se produire quand trop ou trop peu enzyme est utilisé. Les présence de contaminants dans les échantillon d'ADN pouvez inhiber les enzymes , entraînant également une digestion incomplète. Certains les enzymes de restriction nécessitent des cofacteurs pour une activité complète.
D'ailleurs, pourquoi les enzymes de restriction sont-elles ajoutées en dernier ?
Les Enzyme de restriction est généralement le dernier composant ajoutée à une réaction pour s'assurer qu'il n'est pas exposé à des conditions extrêmes. La réaction assemblée doit être mélangée après enzyme une addition. Mélanger toutes les solutions contenant les enzymes de restriction doucement pour éviter enzyme inactivation.
De plus, comment améliorer la digestion par les enzymes de restriction ? N'utilisez pas plus que ce qui est recommandé enzyme montant (par exemple, 10 unités de enzyme par microgramme d'ADN). Réduisez la quantité de enzyme dans la réaction, si nécessaire. Éviter une incubation prolongée du digestion réaction. Utilisez le tampon de réaction recommandé.
Sachez également, pourquoi une enzyme de restriction ne couperait-elle pas ?
La préparation de l'ADN à cliver devrait être exempt de contaminants tels que le phénol, le chloroforme, l'alcool, l'EDTA, les détergents ou les sels excessifs, qui peuvent tous interférer avec Enzyme de restriction activité. Si un inhibiteur (souvent du sel, de l'EDTA ou du phénol) est présent, l'ADN de contrôle pas coupé après mélange.
Pourquoi la quantité d'enzyme peut-elle provoquer l'activité des étoiles ?
L'activité des étoiles est l'assouplissement ou l'altération de la spécificité de la restriction enzyme clivage médié de l'ADN qui pouvez se produisent dans des conditions de réaction qui diffèrent significativement de celles optimales pour le enzyme . L'activité des étoiles peut se produire en raison de la présence de Mg2+, comme est vu dans HindIII, par exemple.
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