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Comment choisissez-vous les clones ?
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Vidéo: Comment choisissez-vous les clones ?

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Anonim

Lorsque choisir une cloner , assurez-vous que les racines sont fortes, blanches et dépassent avidement du milieu de culture. Si les racines sont brunes et ratatinées, ou semblent inactives, remettez-les en place et cherchez-en une meilleure.

D'ailleurs, comment cloner une seule cellule ?

  1. Compter les cellules afin de mettre ~ 16 000 cellules dans le premier puits (A1) d'une plaque de 96 puits contenant 200 µL de milieu.
  2. Retirer 100 µL des cellules contenant A1 et mélanger avec B1, pipeter de haut en bas 3x pour bien mélanger avant de retirer 100 µL et de mélanger avec C1, etc.

Aussi, comment choisissez-vous une colonie de cellules de mammifères ? Placer la plaque sous le microscope pour sélectionner des sains indifférenciés colonies . Choisissez des colonies à l'aide d'une pipette P-20 réglée sur 10ul. Avec attention prendre une colonie sans rompre le colonie en simple cellules , et le transférer dans une plaque à 96 puits avec de la trypsine. Pipeter de haut en bas plusieurs fois pour disperser le colonie.

En conséquence, comment utilisez-vous un cylindre clone ?

À l'aide de pinces moyennes stériles, prenez un cylindre de clonage . Appuyez doucement sur le fond plat du cylindre dans la graisse de silicone lisse et retirer avec un mouvement vertical soudain. Si cela est fait correctement, cela donnera une répartition uniforme de la graisse sur le fond de la cylindre . Met le cylindre sur une colonie.

Comment choisissez-vous les colonies pour les lignées cellulaires stables ?

Le protocole de génération de lignées cellulaires stables nécessite plusieurs étapes, comme indiqué ci-dessous:

  1. Générer une courbe d'élimination pour déterminer la concentration optimale d'antibiotique de sélection.
  2. Transfecter des cellules avec la ou les constructions plasmidiques souhaitées
  3. Sélectionnez et développez des colonies polyclonales stables.
  4. Identifiez les clones uniques par dilution et expansion limitées.

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