Table des matières:

Comment insérer un gène dans un plasmide ?
Comment insérer un gène dans un plasmide ?

Vidéo: Comment insérer un gène dans un plasmide ?

Vidéo: Comment insérer un gène dans un plasmide ?
Vidéo: Les étapes du transfert d'un gène 2024, Novembre
Anonim

Les étapes de base sont:

  1. Coupez le plasmide et "coller" dans le gène . Ce processus repose sur des enzymes de restriction (qui coupent l'ADN) et l'ADN ligase (qui se joint à l'ADN).
  2. Insérer les plasmide dans bactéries.
  3. Grandir beaucoup de plasmide -porteuses de bactéries et les utilisent comme "usines" pour fabriquer la protéine.

Aussi, comment un gène peut-il être inséré dans un plasmide GCSE ?

il est inséré dans un plasmide utilisant des enzymes ligases. les plasmide se rend dans une cellule bactérienne. la bactérie transgénique se reproduit, résultant dans des millions de bactéries identiques qui produisent de l'insuline humaine.

De plus, comment sous-cloner un gène ? Étapes de base pour Sous-clonage Vous libérez et purifiez votre insert du vecteur parent, ligaturez cet insert dans un vecteur de destination préparé, transformez cette réaction de ligature en cellules bactériennes compétentes. Ensuite, vous filtrez les cellules transformées pour l'insert.

En tenant compte de cela, quelles sont les 4 étapes du clonage de gènes ?

Dans les protocoles classiques de digestion par enzyme de restriction et de clonage par ligature, le clonage de tout fragment d'ADN implique essentiellement quatre étapes:

  • isolement de l'ADN d'intérêt (ou ADN cible),
  • ligature,
  • transfection (ou transformation), et.
  • une procédure de présélection/sélection.

Comment amplifier un plasmide ?

Procédure expérimentale

  1. Exécutez la PCR et purifiez le produit PCR: exécutez la PCR pour amplifier votre ADN d'insertion.
  2. Digérez votre ADN:
  3. Isolez votre insert et vecteur par purification sur gel:
  4. Ligaturez votre insert dans votre vecteur:
  5. Transformation:
  6. Isoler le plasmide fini:
  7. Vérifiez votre plasmide par séquençage:

Conseillé: